Journal club 【20170719】関節リウマチにおいて線維芽細胞様滑膜細胞のADAM10をノックダウンするとその遊走能と浸潤能が阻害される

『Knockdown of ADAM10 inhibits migration and invasion of fibroblast-like synoviocytes in rheumatoid arthritis.』

Li D, Xiao Z, Wang G, Song X.

Department of Radiology, The First Teaching Hospital of Jilin University, Changchun, Jilin 130021, P.R. China

Mol Med Rep. 2015 Oct;12(4):5517-23.

 

Methods and Results

     FLS transfectionRA-FLS 70-90% confluenceとなったらADAM10 siRNAもしくはcontrol siRNALipofectamine2000を用いtransfectionした。ADAM10silencingが効いているかはWBを用いて分析した。 :ADAM10 siRNAを用いtranfectionすると、ADAM10は抑制された。

 

     細胞は8時間siRNAで処理し、10μg/mlLPS24時間刺激→上清中のTNF-α、IL-6IL-8CXCL16ELISA法を用いて測定した。: ADAM10knockdownするとTNF,IL-6,IL-8,CXCL16はすべて抑制された。

 

     cell proliferation, migration and invasionRA-FLSADAM10 siRNAもしくはcontrol siRNA24時間transfectionし、48時間LPSで刺激し細胞の増殖、遊走などを確認した。 ADAM10knockdownすると細胞の増殖、遊走、浸潤も抑制された。

 

     Western brotADAM10knockdownするとPI3KAKTともに抑制され、シグナル伝達においても増殖や、遊走、浸潤が抑制された。

 

     年齢6-8週、体重200-250gのオスのマウス30匹に対して、day0day7でウシの2型コラーゲンアジュバンドを投与し免疫性を与える。siRNA/atelocollagen conplexes(0.5mg/kg) 週2回、3週間投与する。 ADAM10 siRNA投与にて関節炎は改善した。

 

⑥ ③の上清を回収しVEGF-A,MMP-3,MMP-9ELISA法で測定。⑤のsarum中でも測定。 ADAM10knockdownすればRA-FLSにおいても、マウスの血清においてもVEGF-A,MMP-3,MMP-9ともに抑制された。

 

conclusion

ADAM10knockdownするとLPSで刺激されたRA-FLSにおいて

炎症性サイトカインを抑制、②PI3K/AKT signaling pathwayの活性化を抑制、③VEGF-A,MMP-3,MMP-9の上昇を抑制しvivoでも同様の結果であったことから、治療のターゲットとなりえる。

 

担当:古屋秀和

 

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